注意： -80度冰箱保存，不建议用此冻存液

 

细胞冻存流程

 

细胞消化与离心

1、按常规方法消化细胞（如胰酶消化），加入完全培养基终止消化。离心（1000 rpm，5分钟），弃上清，收集细胞沉淀。

2、加入冻存液  向细胞沉淀中直接加入 1 mL 预冷（4℃）的快速冻存液，轻柔吹打混匀成单细胞悬液。

3、分装与标记  将细胞悬液转移至冻存管中，标注细胞名称、冻存日期及操作者。

4、快速冻存   无需程序降温，直接将冻存管放入液氮。

 

细胞复苏流程

 

1、快速解冻  从液氮中取出冻存管，立即置于 37℃水浴 中轻柔摇晃，待冻存液融化至仅剩少量冰晶时停止水浴（约1-2分钟）。

2、稀释与离心  将细胞悬液转移至含 1 mL 预热的完全培养基 的离心管中，轻柔混匀。

离心（1000 rpm，5分钟），弃上清，去除残留DMSO。

3、重悬与培养  用新鲜完全培养基重悬细胞，接种至培养皿中，37℃、5% CO₂ 培养箱中静置培养。

 

注意事项

 

1、冻存液使用  直接液氮冻存法适用于部分贴壁细胞，若细胞敏感，建议先试用

2、复苏关键  解冻时保留少量冰晶可减少渗透压对细胞的损伤

3、安全提示  液氮操作需防冻伤，冻存管密封严实以防爆炸